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质粒构建
Protein Production

质粒构建

  • 分类:蛋白制备
  • 发布时间:2020-08-14 00:00:00
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概要:
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除非客户指定构建方式或文献中有充分记载,佰翱得会从四个主要表达宿主(细菌,酵母,昆虫细胞和哺乳动物细胞)中按照内部评估的结果,选择合适的方案表达重组蛋白。 我们提供了用于实现表达的质粒和细胞选择。下是我们可以尝试在大肠杆菌中进行表达的参数概述:

 

1. 筛选表达标签和载体

N末端的标签
6xHis-TEV
6xHis-GST-TEV
6xHis-MBP-TEV
6xHis-TrxB-TEV
6xHis-NusA-TEV
6xHis-Dsbc-TEV
6xHis-IF2-TEV
6xHis-FH8-TEV
6xHis-Ferritin-TEV

C末端的标签
-TEV-6xHis
-TEV-GFP-6xHis
-TEV-6xHis-10R
-TEV-GST-6His

载体
pETDuet-1
pACYADuet-1
pCold TF
pGEX-4T
pET21a
pET28a
pET32a

 

2. 筛选感受态

BL21 (DE3)
Rosetta (DE3)
Origami 2 (DE3)
C41 (DE3)orC43 (DE3)
Arctic (DE3)
Tuner(DE3)0.1mM IPTG
BL21 (DE3) pLysS
最常用的
稀有密码子
二硫键及稀有密码子
疏水性蛋白
TPN30 & TPN60 分子伴侣
为了得到更好的表达适当的降低表达量
降低毒性蛋白的本底表达

 

3. 筛选分子伴侣

pG-KJE8,pGro7, pKJE7, pGTf2,pTf16

Dsba和Dsbc(用pET21a载体在细胞周质空间中表达)

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